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多糖多酚植物RNA提取试剂盒图片
产品货号:
KD2159
中文名称:
多糖多酚植物RNA提取试剂盒
英文名称:
Polysaccharide polyphenol plant RNA Extraction Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

保存:2~8℃

Biorab植物RNA快速提取试剂盒适用于绝大多数植物(包含多糖多酚复杂植物样本)RNA提取,可以简单快速地从各种来源的植物组织中纯化高质量的总RNA。纯化好的总RNA可用于mRNA分离,RT-PCR,Northern杂交等下游分子实验。
操作步骤:(样品裂解,样品纯化,RNA收集)
离心条件均优先选择4℃,室温离心也可以。
一:样品裂解
1.液氮研磨法
取1mL裂解液加入1.5mL离心管中。将100mg植物组织用液氮研磨成粉末,将其转移到含有裂解液的离心管中,立即剧烈振荡20秒后用枪头吹打混匀或涡旋震荡使样本充分裂解。
2.匀浆法
先将植物组织剪切成小块,放入10~15mL塑料离心管中,加入1mL裂解液。然后用匀浆器匀浆5~20秒,确定大部分样品破碎后(匀浆会产生大量泡沫,间断匀浆避免温度过高和泡沫溢出,不影响效果)。将裂解液转移至1.5mL离心管中。
注意:低温可能导致裂解液有白色悬浮物,请置于65℃水浴充分溶解后使用。裂解液含巯基乙醇,请于通风橱内操作。
二:样品纯化
1.将裂解物12000rpm离心2~3min,吸取上清1mL到1.5mL离心管。
2.在上清中加入0.3mL的RNA纯化液和0.2mL自备氯仿,在振荡器上振荡30秒,溶液呈均匀的乳浊状。
注意:如样品简单,此步可省略。具体操作为:吸取上清1mL,继续12000rpm离心10min,取上清后接步骤(二,4)加等体积RNA结合液,上纯化柱。
3.12000rpm离心3~5min,取上清到新的1.5mL离心管中(避免触及分层界面,下层会有大量DNA和蛋白污染,避免污染。)
4.上清中加入等体积的RNA结合液,颠倒混匀,分两次加入同一个RNA纯化柱中(如有絮状物或沉淀产生,一并加入纯化柱中)。12000rpm离心1min,弃穿透液。
5.在纯化柱中加入0.5mL RNA洗涤液,室温12000rpm离心半分钟,弃穿透液。重复洗涤一次。(洗涤液使用后拧紧瓶盖,防止挥发)
6.如需去除DNA污染,参照步骤(四)可选步骤,用DNase I处理。
三:RNA收集
1.将结合有RNA的纯化柱12000rpm离心1min,甩干乙醇。(乙醇的残留将会降低洗脱效果和影响下游实验,或者适当延长离心时间,将有助于乙醇的去除)
2.弃收集管,将柱芯转移到1.5mL的RNase-free离心管中(自备),加入30-50uLRNA溶解液,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟洗脱RNA。得到的RNA可直接用于后续实验或者-80℃存放。
3.如果要提高RNA产量,加入30-50uLRNA溶解液重复洗脱一次,合并两次穿透液;如果要提高RNA浓度,使用第一次的洗脱液加回到吸附柱中重复洗脱。
注意:建议RNA用于下游实验之前,先进行质量检测。经变性琼脂糖凝胶电泳后,会有清晰的28S和18S条带,以及中间弥散的mRNA条带,其中28S条带是18S条带亮度的1.5~2倍。有时还包括跑在最前面的较暗的5S条带。如果条带不清晰或者弥散,可能是提取过程中或者材料保存过程中RNA发生了降解。小于200bp的RNA分子不能有效结合到吸附柱上。A260/A280比值1.8~2.0对应RNA纯度90~100%之间。
四.DNA清除(可选步骤)
1.接样品纯化步骤(二,5)。
DNase I工作液配置:取RNase-free离心管,加入DNase I反应液48μL,DNase I溶液2μL。吹打混匀。(DNase I置于-20℃保存)
2.将DNase工作液在37℃预热1分钟,然后全部加入到RNA纯化柱中,室温放置2分钟。
注意:2分钟一般足够降解大多数情况下的DNA污染。如果DNA没有彻底降解(可能由于样品中残留的杂质抑制了DNase的活性),此步骤可以延长到5分钟或10分钟。
3.直接在纯化柱中加入0.7mLRNA洗涤液,室温离心半分钟,弃穿透液。
4.接RNA收集步骤(三)。
相关搜索:多糖多酚植物RNA提取试剂盒
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